iQue^® Immune Cell-Based Kitを用いたイムノフェノタイピングおよび機能解析

iQue^® Human T Cell Activation Cell and Cytokine Profiling Kitは、T細胞の活性化状態を評価すると同時に、その健全性やサイトカイン分泌における役割に関する情報を提供します。1回洗浄アッセイのためハンズオンタイムが少なくて済み、細胞とビーズの両方を測定して以下の生物学的見識を提供します：

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主な利点

• スピード：1回のアッセイで複数の測定を実行できるため 、サンプルからアクション可能なデータへの時間を短縮し、ハンズオンタイムと全体的な試験数を削減して、貴重なサンプルを節約できます。
• 結果：単一ウェルアッセイで15のエンドポイントを取得し、T細胞フェノタイプ、各フェノタイプにおける早期・後期細胞活性化マーカー、細胞生存率、細胞数、増殖、分泌されるエフェクターサイトカインを測定します。
• 生物学的見識：1つのウェルで細胞とサイトカインの検出を多重化することで、同一細胞から細胞の健康状態と機能データを取得します。
• シンプルさ：単一プラットフォームでのアッセイとデータ取得により 、複数のソースからデータを取得して相関させる時間を削減します。
• 自動化対応：優れた日次再現性を備え、自動化されたハイスループットスクリーニングに対応しています。
• 生存免疫細胞は 、蛍光膜完全性評価色素で染色することにより、死細胞と区別されます。
• 蛍光抗体パネルでの染色によりイムノフェノタイプが決定され、 CD3+ T細胞、CD3- 非 T細胞、CD4+ Tヘルパー細胞、CD8+ T細胞傷害性細胞を分離します。
• T細胞表現型は、3 つの活性化マーカー、CD69 （初期）、CD25（後期）、HLA-DR（さらに後期、強い刺激による）の発現についてプロファイルされます。
• 最適化されたワークフローにより、活性化されたT細胞が分泌するエフェクターサイトカイン、Th1サイトカインIFNγ/多機能サイトカインTNFαを同一アッセイウェルで測定できます。

ワークフロー

iQue^® Human T Cell Companion Kitは、iQue^® Human T Cell Activation Cell and Cytokine Profiling Kitやその他のT Cell Immunology Kitにすでに含まれているサイトカインに加え、追加のサイトカインを測定するために使用できます。T Cell Companion Kitsでは以下のサイトカインを利用可能です。

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iQue^® Human T Cell Memory Kitは、T細胞のメモリーフェノタイプと機能を異なる段階で測定すると同時に、その健全性やサイトカイン分泌における役割に関する情報を提供します。1回洗浄アッセイのためハンズオンタイムが少なくて済み、細胞とビーズの両方を測定して以下の生物学的見識を提供します：

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主な利点

• スピード：1回のアッセイで複数の測定を実行できるため 、サンプルからアクション可能なデータへの時間を短縮し、ハンズオンタイムと全体的な試験数を削減して、貴重なサンプルを節約できます。
• 結果：単一ウェルアッセイで11のエンドポイントを取得し、異なる段階におけるT細胞メモリーフェノタイプと機能、細胞生存性、細胞数、および分泌炎症性／抗炎症性サイトカインを測定します。
• 1つのウェルで細胞とサイトカインの検出を多重化することで、同一細胞から細胞の健康状態と機能データを取得します。
• 単一プラットフォームでのアッセイとデータ取得により 、複数のソースからデータを取得して相関させる時間を削減します。
• 生存免疫細胞は 、蛍光膜完全性評価色素で染色することにより、死細胞と区別されます。
• 蛍光抗体パネルでの染色によりイムノフェノタイプが決定され、 CD3+ T細胞、CD3- 非 T細胞、CD4+ Tヘルパー細胞、CD8+ T細胞傷害性細胞を分離します。
• パネルには、T ナイーブ/メモリー/エフェクター細胞フェノタイピングのための 5 種類の T 細胞表面マーカーとして、CD45RA 、CD45RO、CD27（長期生存）、CD62L、CD95も含まれています。
• 最適化されたワークフローにより、活性化されたT細胞が分泌するエフェクターサイトカイン、すなわち炎症性サイトカインIFNγおよび抗炎症性サイトカインIL-10を、同一のアッセイウェル内で測定できます。

ワークフロー

iQue^® Human T Cell Killing Kit（CD3、CD4、CD8）は、ヒトT細胞サブセットの確実な同定のために設計されています。このアッセイは、iQue^® 3ハイスループットスクリーニング（HTS）サイトメトリープラットフォーム（VBRおよびVYB構成）での実行に最適化されており、ハイスループットサンプリング、フローサイトメトリー検出、およびマルチプレックス化機能を組み合わせています。

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主な利点

• ハイスループット：96-well形式で10 µL、384-well形式で5 µLの細胞を使用したT細胞のハイスループットなイムノフェノタイピング用に設計されています。
• 生物学的見解：単一ウェル内でフェノタイプと機能をマルチプレックス解析することで、同一細胞から機能データと細胞の健康状態を解析するオプションがあります。
• 柔軟性：サブポピュレーションのさらなる特性解析のために追加のサイトカインを選択できます。
• T細胞は、蛍光抗体パネルでの染色によりイムノフェノタイプが決定され、CD3+、CD4+、CD8+ 細胞が分離されます。
• Qbeadパネルに対応し、サイトカイン検出と細胞フェノタイピングを同時に行うことが可能です。
• 最適化されたワークフローにより、サブポピュレーションのさらなる特性解析のためにサイトカインを追加できる柔軟性を提供します。

ワークフロー

iQue^® Human T Cell Exhaustion Kitは、T細胞疲弊マーカーのマルチプレックス解析、Tヘルパー細胞およびT細胞傷害性細胞のフェノタイピング、ならびに分泌サイトカインのビーズベースの測定を、同一アッセイ内で容易に実施できるよう設計されています。この最適化されたアッセイには、以下のユニークな利点があります：

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主な利点

• スピード： 1回のアッセイで複数の測定を実行できるため 、サンプルからアクション可能なデータへの時間を短縮し、ハンズオンタイムと全体的な試験数を削減して、貴重なサンプルを節約できます。
• 結果：単一ウェルアッセイで11のエンドポイントを取得し、T細胞疲弊のフェノタイプと機能、刺激に対するサイトカイン分泌、細胞生存率を測定。オプションの細胞増殖評価用色素により、T細胞疲弊を逆転させる分子のスクリーニングが可能です。
• 生物学的見識： 細胞とサイトカインの検出を1つのアッセイでマルチプレックス化することで、同一ウェルから機能データを生成し 、細胞の健康状態を解析します。
• シンプルさ：単一プラットフォームでのアッセイとデータ取得および解析により 、複数のソースからデータを取得して相関させる時間を削減します。
• 生存免疫細胞は 、蛍光膜完全性評価色素で染色することにより、死細胞または膜が損傷した細胞と区別されます。
• 蛍光抗体パネルでの染色によりイムノフェノタイプが決定され、CD3+ T細胞 、CD3- 非 T 細胞、CD3+CD4+ ヘルパー T 細胞、CD3+CD8+ 細胞傷害性 T 細胞を区別します。
• このパネルには、T細胞疲弊の3つのマーカーであるPD-1、Tim-3、Lag-3も含まれています。
• 最適化されたワークフローにより、活性化されたT細胞が分泌するサイトカイン（IFNγおよびTNF）を同一アッセイウェル内で測定できます。
• また、必要に応じて、オプションの細胞増殖評価用色素（キットに含まれています）を使用して、サンプル細胞の増殖能力を測定することもできます。

ワークフロー

iQue^® Human NK Cell Killing Kitは、同一アッセイ内で細胞のフェノタイプマーカーと機能マーカー、ならびにビーズベースの分泌サイトカイン測定をマルチプレックス化するために、使いやすく設計されています。1回洗浄アッセイのためハンズオンタイムが少なくて済み、細胞とビーズの両方を測定して以下の生物学的見識を提供します：

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主な利点

• スピード：1回の実験で複数の測定を実行できるため 、サンプルからアクション可能なデータへの時間を短縮し、ハンズオンタイムと全体的な試験数を削減して、貴重なサンプルを節約できます。
• 結果：単一ウェルアッセイで9つのエンドポイントとして活性化マーカー（CD69およびCD25）、細胞膜完全性、細胞数、分泌炎症性サイトカインIFNγ、アポトーシス促進性プロテアーゼグランザイムBを測定します。
• 生物学的見解：単一ウェル内でフェノタイプと機能をマルチプレックス解析することで、同一細胞から機能データを生成し、細胞の健康状態を解析します。
• 使いやすさ：iQue Forecyt^®による単一プラットフォームでのアッセイとデータ解析により 、複数のソースからデータを取得して相関させるために必要な時間を削減します。
• 柔軟性：iQue^® Human NK Cell Companion Kits のバリデートされたリストから、追加のサイトカイン測定項目を選択できます。
• 生存免疫細胞は 、蛍光膜完全性評価色素で染色することにより、死細胞と区別されます。
• 標的細胞は、蛍光エンコーダー色素での染色によりエフェクター細胞と区別されます。
• NK細胞は、蛍光抗体パネルでの染色によりイムノフェノタイプが決定され、CD3- CD56+ NK 細胞が分離されます。その後、NK 細胞上の IgG Fc 受容体 III (CD16) の発現を評価できます。
• パネルには、NK細胞の機能的活性化マーカーであるCD69およびCD25の2種類も含まれています。
• 最適化されたワークフローにより、炎症促進性エフェクター細胞が分泌するサイトカインであるIFNγと、アポトーシス促進性セリンプロテアーゼであるグランザイムBを同じアッセイウェルで測定できます。

ワークフロー

iQue^® Human T Cell Phenotyping Kit（CD3、CD4、CD8）は、ヒトT細胞サブセットの確実な同定のために設計されています。このアッセイは、iQue^® 3ハイスループットスクリーニング（HTS）サイトメトリープラットフォーム（VBRおよびVYB構成）での実行に最適化されており、ハイスループットサンプリング、フローサイトメトリー検出、およびマルチプレックス化機能を組み合わせています。

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主な利点

• ハイスループット：96-well形式で10 µL、384-well形式で5 µLの細胞を使用したT細胞のハイスループットなイムノフェノタイピング用に設計されています。
• 生物学的見識：単一ウェル内でフェノタイプと機能をマルチプレックス解析することで、同一細胞から機能データと細胞の健康状態を解析するオプションがあります。
• 柔軟性：サブポピュレーションのさらなる特性解析のために追加のマーカーとサイトカインを選択できます。
• T細胞は、蛍光抗体パネルでの染色によりイムノフェノタイプが決定され、CD3+、CD4+、CD8+ 細胞が分離されます。
• Qbeadパネルに対応し、サイトカイン検出と細胞フェノタイピングを同時に行うことが可能です。
• 最適化されたワークフローにより、サブポピュレーションのさらなる特性解析のためにマーカーとサイトカインを追加できる柔軟性を提供します。

ワークフロー

データ解析

1日間培養したヒトPBMCのフェノタイピング解析。A. すべてのイベントにおいてライブセルのゲートを設定し、デブリ/死細胞を除外します。B. ライブセルから二重結合細胞を除去し、シングルセルを取得します。C. シングルセルにおけるCD3+細胞。D. CD3+細胞のCD4+およびCD8+サブセット。