iQue® 免疫細胞ベースキットを用いた免疫表現型解析および機能解析
複数の細胞学的エンドポイントの測定に
iQue® 免疫細胞ベースキットは 、生存率、増殖、サイトカイン放出など、複数の免疫学的細胞表現型および機能の解析を可能にします 。これらのキットのほとんどは、低洗浄プロトコル向けに最適化されています。
各キットは、お客様のスクリーニングニーズに合わせて様々なサイズでご用意しております。iQue Forecyt®ソフトウェアには、これらのキットのほとんどに対応した自動化テンプレートが搭載されており、データの取得と解析を容易にします。全てがiQue® HTSサイトメトリーでの使用に最適化されております。
ご利用可能なiQue®表現型および機能キットには、以下のものが含まれます：
iQue®ヒトT細胞消耗キット：
マルチプレックスT細胞消耗解析、Tヘルパー細胞およびT細胞傷害性細胞の表現型解析、ならびにビーズベースの分泌サイトカイン測定を、同一アッセイで実施可能です。
iQue®ヒトT細胞有効化キット
iQue®ヒトT細胞有効化キット
iQue®ヒトT細胞有効化・細胞およびサイトカインプロファイルキットは、T細胞の有効化状態を評価するとともに、その健康状態やサイトカイン分泌における役割に関する情報を提供します。このワンウォッシュアッセイは最小限の操作時間で実施でき、細胞とビーズの両方を測定することで、以下のバイオ医薬品の見解を提供します：
主な利点
- スピード： 1回のアッセイで複数の測定を実行可能。これにより 、操作時間を短縮し、総テスト数を削減し、貴重なサンプルを節約します。
- 結果：単一ウェルアッセイで15のエンドポイントを取得。T細胞の表現型、各表現型における早期・後期有効化マーカー、細胞生存率、細胞数、増殖、分泌されるエフェクターサイトカインを測定します。
- 生物学的見識： 1つの-wellで細胞とサイトカインの検出を多重化することで、同一細胞から細胞の健康状態と機能データを取得します 。
- 簡便性：単一プラットフォームでのアッセイとデータ取得により 、複数のソースからのデータ取得や相関付けにかかる時間を削減します 。
- 自動化対応：優れた日次再現性を備え、自動化されたハイスループットスクリーニングに対応しております。
- ライブセルは 、蛍光性メンブレン完全性染色剤による染色により、死細胞と区別されます 。
- 蛍光抗体パネルによる染色により、 CD3+ T細胞、CD3- 非 T細胞、CD4+ Tヘルパー細胞、CD8+ T細胞傷害性細胞を分離し、細胞の免疫表現型を解析します 。
- T細胞の表現型は、3 つの活性化マーカー、CD69 （初期）、CD25（後期）、HLA-DR（さらに後期、強い刺激による）の発現についてプロファイルされます 。
- 最適化されたワークフローにより、有効化T細胞が分泌するエフェクターサイトカイン、Th1サイトカインIFNγ/多機能サイトカインTNFαを同一アッセイウェルで測定することが可能となります。
ワークフロー
iQue®ヒトT細胞コンパニオンキット
iQue®ヒトT細胞コンパニオンキット
iQue®ヒトT細胞コンパニオンキットは、iQue®ヒトT細胞有効化細胞およびサイトカインプロファイルキットやその他のT細胞免疫学キットに既に含まれているサイトカインに加え、追加のサイトカインを測定するためにご利用いただけます。以下に、T細胞コンパニオンキットでご利用可能なサイトカインの一覧を記載いたします。
iQue®ヒトT細胞記憶キット
iQue®ヒトT細胞記憶キット
iQue®ヒトT細胞メモリーキットは、T細胞のメモリー表現型と機能を異なる段階で測定するとともに、その健全性やサイトカイン分泌における役割に関する情報を提供します。このワンウォッシュアッセイは最小限の操作時間で実施でき、細胞とビーズの両方を測定することで、以下のバイオ医薬品の見識を提供します：
主な利点
- スピード： 1回の試験で複数のアッセイを実行可能となり、 作業時間を短縮、試験総数を削減、貴重なサンプルを節約することで、サンプルから実用的なデータまでを迅速に提供します 。
- 結果：単一ウェルアッセイで11のエンドポイントを測定。異なる段階におけるT細胞の記憶型表現型と機能、細胞生存率、細胞数、分泌されるプロ/抗炎症性サイトカインを評価します。
- バイオ医薬品の見識： 1つのウェルで細胞とサイトカインの検出を多重化することで、同一細胞から細胞の健康状態と機能データを生成します 。
- 簡便性：単一プラットフォームでのアッセイとデータ取得により 、複数のソースからのデータ取得や相関付けにかかる時間を削減します 。
- ライブ免疫細胞は、蛍光メンブレン完全性染色剤による染色により、死細胞と区別されます。
- 蛍光抗体パネルによる染色により、 CD3+ T細胞、CD3- 非 T細胞、CD4+ Tヘルパー細胞、CD8+ T細胞傷害性細胞を分離し、細胞の免疫表現型を解析します 。
- 本パネルには、T ナイーブ/メモリー/エフェクター細胞の表現型解析のための 5 種類の T 細胞表面マーカー（CD45RA 、CD45RO、CD27（長時間生存）、CD62L、CD95）も含まれています。
- 最適化されたワークフローにより、有効化したT細胞が分泌するエフェクターサイトカイン、すなわち炎症促進性サイトカインIFNγおよび抗炎症性サイトカインIL-10を、同一のアッセイ-well内で測定することが可能となります。
ワークフロー
iQue®ヒトT細胞殺傷キット
iQue®ヒトT細胞殺傷キット
iQue®ヒトT細胞殺傷キット（CD3、CD4、CD8）は、ヒトT細胞サブセットの確実な同定を目的として設計されております。本アッセイは、iQue® 3ハイスループットスクリーニング（HTS）サイトメトリープラットフォーム（VBRおよびVYB構成）での実行に最適化されており、高スループットサンプリング、サイトメトリー検出、およびマルチプレクシング能力を組み合わせております。
主な利点
- ハイスループット：96-wellおよび384-wellプレートフォーマットで、10µL（96-wellフォーマット）および5µL（384-wellフォーマット）の細胞を用いて、T細胞のハイスループット免疫表現型解析を行うために設計されています。
- 生物学的見解：単一ウェル内で細胞表現型と機能をマルチプレックス解析することで、同一細胞から機能データと細胞健康状態の分析オプションを生成します。
- 柔軟性：サブポピュレーションのさらなる特性解析のために、追加で添加するサイトカインを選択できます。
- T細胞は、蛍光抗体パネルによる染色により免疫表現型が分析され、CD3+、CD4+、CD8+ 細胞が分離されます。
- Qbeadパネルへの対応により、サイトカイン検出と細胞表現型解析を同時に行うことが可能です。
- 最適化されたワークフローにより、サブポピュレーションのさらなる特性解析のために追加のサイトカインを追加できる柔軟性を提供します。
ワークフロー
iQue®ヒトT細胞消耗キット
iQue®ヒトT細胞消耗キット
iQue®ヒトT細胞消耗キットは、T細胞消耗マーカーの多重測定、Tヘルパー細胞およびT細胞傷害性細胞の表現型解析、ならびに分泌サイトカインのビーズベース測定を、同一アッセイ内で容易に行えるよう設計されております。この最適化されたアッセイには、以下の特長がございます：
主な利点
- スピード： 複数のアッセイを1回の実験で実行可能となるため 、作業時間を短縮し、全体的な試験回数を削減し、貴重なサンプルを節約することで、サンプルから実用的なデータまでを迅速に得られます 。
- 結果：単一-wellアッセイで11のエンドポイントを取得。T細胞の消耗状態の表現型と機能、刺激に対するサイトカイン分泌、細胞生存率を測定。オプションの増殖染色剤により、T細胞の消耗状態を逆転させる分子のスクリーニングを考慮に入れることができます。
- 生物学的見識： 細胞とサイトカインの検出を1つのアッセイで多重化することで、同一-wellから機能データを生成し 、細胞の健康状態を分析します。
- 簡便性：単一プラットフォームによるアッセイ、データ取得、解析により、 複数のソースからのデータ取得と相関付けにかかる時間を削減します 。
- ライブセルは 、蛍光メンブレン染色剤による染色により、死細胞やメンブレン損傷細胞と区別されます 。
- 蛍光抗体パネルによる染色により 、CD3+ T細胞 、CD3- 非 T 細胞、CD3+CD4+ ヘルパー T 細胞、CD3+CD8+ 細胞傷害性 T 細胞を区別する免疫表現型解析を行います 。
- このパネルには、T細胞の疲弊を示す3つのマーカー、PD-1、Tim-3、Lag-3も含まれています。
- 最適化されたワークフローにより、有効化したT細胞が分泌するサイトカイン（IFNγおよびTNF）を同一アッセイ-well内で測定することが可能です。
- また、必要に応じて、オプションの増殖染色剤（キットに含まれています）を使用して、サンプル細胞の増殖能力を測定することも可能です。
ワークフロー
iQue® ヒトNK細胞殺傷キット
iQue® ヒトNK細胞殺傷キット
iQue®ヒトNK細胞殺傷キットは、同一アッセイ内で細胞の表現型マーカーと機能マーカー、ならびにビーズベースの分泌サイトカイン測定をマルチプレックス化して容易に実施できるよう設計されております。このワンウォッシュアッセイは最小限の操作時間で、細胞とビーズの両方を測定し、以下の生物学的見識を提供します：
主な利点
- スピード：サンプルから実用的なデータまで、1回の実験で複数のアッセイを実行できるため、操作時間を短縮し、必要な試験総数を削減し、貴重なサンプルを節約します。
- 結果：単一ウェルアッセイで9つのエンドポイント（活性化マーカー（CD69およびCD25）、細胞膜完全性、細胞数、分泌型炎症性サイトカインIFNγ、アポトーシス促進プロテアーゼグランザイムB）を測定します。
- 生物学的見解： 単一-well内で細胞表現型と機能を多重化することで、同一細胞から機能データを生成し 、細胞の健全性を分析します。
- 使いやすさ： iQue Forecyt®による単一プラットフォームでのアッセイとデータ解析により 、複数のソースからのデータ取得と相関付けに必要な時間を削減します。
- 柔軟性：iQue® Human NK Cell Companion Kits のバリデートされたリストから、追加のサイトカイン測定項目をお選びいただけます。
- ライブセルは 、蛍光性メンブレン完全性染色剤による染色により、死細胞と区別されます 。
- 標的細胞は、 蛍光エンコーディング染色によりエフェクター細胞と区別されます 。
- NK 細胞は、CD3- CD56+ NK 細胞を分離するための蛍光抗体パネルによる染色により免疫表現型が判定されます。その後、NK 細胞上の IgG Fc 受容体 III (CD16) の発現を評価することができます。
- 本パネルには、NK細胞の機能的有効化マーカーであるCD69およびCD25の2種類も含まれています。
- 最適化されたワークフローにより、同じアッセイウェル内で、炎症促進性エフェクター細胞が分泌するサイトカインであるIFNγと、アポトーシス促進性セリンプロテアーゼであるグランザイムBの測定が可能です。
ワークフロー
iQue®️ヒトT細胞表現型解析キット
iQue®ヒトT細胞フェノタイピングキット（CD3、CD4およびCD8）
iQue®ヒトT細胞フェノタイピングキット（CD3、CD4およびCD8）は、ヒトT細胞サブセットの信頼性の高い同定を目的として設計されております。本アッセイは、iQue® 3ハイスループットスクリーニング（HTS）サイトメトリープラットフォーム（VBRおよびVYB構成）での実行に最適化されており、高スループットサンプリング、サイトメトリー検出、およびマルチプレクシング能力を組み合わせております。
主な利点
- ハイスループット：96-wellおよび384-wellプレートフォーマットで、10µL（96-wellフォーマット）および5µL（384-wellフォーマット）の細胞を用いて、T細胞のハイスループット免疫表現型解析を行うために設計されています。
- バイオ医薬品の見解：単一ウェル内で細胞表現型と機能をマルチプレックス解析することで、同一細胞から機能データと細胞健康状態の分析オプションを生成します。
- 柔軟性：サブポピュレーションのさらなる特性解析のために、追加のマーカーやサイトカインを選択して追加することが可能です。
- T細胞は、蛍光抗体パネルによる染色により免疫表現型が分析され、CD3+、CD4+、CD8+ 細胞が分離されます。
- Qbeadパネルに対応しており、サイトカイン検出と細胞表現型解析を同時に行うことが可能です。
- 最適化されたワークフローにより、サブポピュレーションのさらなる特性解析のために追加マーカーやサイトカインを追加できる柔軟性を提供します。
ワークフロー
データ解析
1日間培養したヒト末梢血単核細胞（PBMC）の表現型解析。A. すべてのイベントにおいてライブセルのゲートを設定し、デブリ/死細胞を除外します。B. ライブセルから二重結合細胞を除去し、シングルセルを取得します。C. シングルセルにおけるCD3+細胞。D. CD3+細胞のCD4+およびCD8+サブセット。
