ザルトリウスのハイスループットスクリーニング（HTS）サイトメトリー

0.2〜150マイクロメートルのサイズの浮遊異物または細胞であれば、解析に適しています。固形組織由来の細胞は、解析前に分離する必要があります。

さらに詳しい情報を得るために、細胞を蛍光分子で標識することができます。具体的には、蛍光標識抗体を細胞表面のタンパク質（抗原）に結合させることができます。細胞に多くの抗原が存在すると、蛍光標識抗体が多く結合し、強い蛍光シグナルが出ます。逆に、抗原が少ないかない細胞は、弱い蛍光シグナルしか出しません。

蛍光マーカー（蛍光色素結合抗体など）は、目的のエピトープに直接結合して、その生物学的・生化学的な性質の測定を可能にします。蛍光マーカーは、細胞集団の識別と定量、細胞表面受容体や細胞内ターゲットの検出、細胞ソーティング、イムノフェノタイピング、アポトーシス研究など、幅広いアプリケーションで活躍します。

フローサイトメトリー実験では、測定点を通過して検出された細胞は、それぞれ1つのイベントとしてカウントされます。検出される光の種類（前方散乱光、側方散乱光、そしてそれぞれ異なる波長の蛍光発光）には、それぞれ固有のチャンネルがあります。

各イベントのデータは個別にプロットされ、すべてのイベントについて各チャンネルで検出された光の信号強度を表します。このデータは、さまざまな方法で視覚的に表現できます。フローサイトメトリーで最もよく使われるデータグラフには、ヒストグラム、ドットプロット、等高線図があります。

ヒストグラム

ヒストグラムは、2つ以上の集団の蛍光強度を比較するときによく使われます。

ドットプロット

ドットプロットは、散布図上で2つまたは3つのパラメーターを同時に比較するもので、各イベントは1つの点（ドット）として表されます。ドットプロットは、複数の変数の関係を一度に示す図で、パラメーターは散乱光と蛍光シグナルの任意の組み合わせが使えます。

等高線プロット

等高線プロットは、収集されたイベント数に関係なく、集団の相対的な頻度を表示します。等高線プロットは、同じような細胞数を表す線で結んだ確率の等高線を表示します。集団の周りに同心円状のリングが形成され、密度が高いほど、等高線プロット上でリングが密接になります。

図1. フローサイトメトリーデータの例。(A)  Raji細胞（iQue^® Cell Proliferation and Encoding （V/Blue） Dyeで明るく標識）、Ramos細胞（エンコーダー色素で薄く標識）、Jurkat細胞（無標識）を混合し（5K/well）、CDC アッセイを行い、エンコーダー色素の蛍光に基づいて分離した結果がヒストグラムで表示されています。(B) iQue Forecyt^® の事前既知ゲートを使用したヒトT細胞サブセットの自動フェノタイピングのドットプロット例。(C) CD14陽性集団を明確にゲーティングした等高線プロット。

フローサイトメトリーは、免疫学、分子生物学、細菌学、ウイルス学、がん生物学、感染症モニタリングなど、幅広い分野で活躍する強力なツールです。フローサイトメトリーで最もよく使われるのが、イムノフェノタイピングです。フローサイトメトリーの特長を活かして、混合細胞集団を対象に、表面マーカー、サイトカイン解析、細胞の健康状態など、複数のパラメーターを同時に解析できます。