細胞凍結培地および塩基性ソリューション

細胞は凍結中に水分を失います。これにより細胞は縮小し、最小容量を下回ると急速に生存能力を失います。ジメチルスルホキシド（DMSO）などの凍結保護剤を添加することで、これらの影響を軽減できます。

培地には、緩慢な凍結過程において氷結晶の形成を防ぎ、細胞の生存率を維持するために、水分を吸収する薬剤を含める必要があります。

血清は、凍結保存に不要なコンポーネントを含むブラックボックスであり、凍結｜融解過程において細胞に悪影響を及ぼす可能性さえあります。動物由来成分フリーのソリューションは、再現性と一貫性に加え、生存率と回復率の向上に寄与します。

DMSOは細胞に対して細胞毒性を示します。凍結保存の際、細胞は10％以下に希釈したDMSOソリューション中でのみ保存が可能です。

DMSOを使用せずに細胞を凍結することは可能です。ただし、同等の効果を持つ無毒の保護剤をご用意いただければ、という条件付きとなります。

ほとんどの細胞培養は、-130°C以下の温度で、無期限とは言えませんが、長年にわたり保存することが可能です。ATCCでは、40年以上凍結保存された培養物から細胞を回復させた実績があります。凍結保存の利点は、必要な装置や試薬への投資をはるかに上回ります。主な利点としては以下の点が挙げられます：

• 装置の故障や微生物・他細胞株によるコンタミネーションから培養を失うことを防ぐための安全ストックの生成。
• 使用されていない培養を維持するために必要な時間、エネルギー、原料を節約できること。
• 有限の細胞分裂回数を持つ細胞を保存し、最終的に細胞老化を防ぐこと。
• 遺伝的不安定性および／または選択に起因する表現型のドリフトを防止します。
• 一連の実験に使用可能な標準試薬の作成（出典：ATCC動物細胞培養ガイド）

1. 細胞を300～400×gで4～5分間遠心分離し、細胞ペレットを得ます。その後、無菌的に上清を除去してください。
2. 沈殿を2°C～8°Cの凍結保存ソリューションに懸濁します。十分に撹拌した後、浮遊を凍結用チューブに移します（例：1.0 mLの浮遊を1.5 mL凍結用チューブに）。
3. 高いリカバリー率を可能とする凍結技術を用いて細胞を徐々に凍結（1分あたり1～2℃）し、バイアルを液体窒素（気相）中に保管します。あるいは、バイアルを凍結容器に入れ、-80℃へ一晩移します。翌日、凍結用チューブを液体窒素へ移します（気相を推奨いたします）。
4. 液体窒素中での24時間保存後、1本のバイアルを融解し、凍結保存の効率を確認してください。