細胞凍結培地および塩基性溶液

細胞は凍結中に水分を失い、縮小することで、最小容量を下回ると急速に生存率が低下します。ジメチルスルホキシド（DMSO）などの凍結保護剤を添加することで、これらの影響を軽減できます。

また、培地には、緩慢な凍結過程において氷結晶の形成を防ぎ、細胞の生存率を維持するため、水分を吸収する薬剤を含める必要があります。
 

血清は、凍結保存に不要な成分を含むブラックボックスであり、凍結｜融解の過程において細胞に悪影響を及ぼす可能性があります。動物由来成分フリーの保存液は、再現性と一貫性の向上に加え、細胞の生存率および回収率の向上に寄与します。

DMSOは細胞に対して細胞毒性を示します。そのため、凍結保存の際に細胞を保存できるのは、10%以下に希釈したDMSOを含む溶液中に限られます。

DMSOを使用せずに細胞を凍結することは可能です。ただし、同等の効果を有する無毒性の保護剤が必要となります。

ほとんどの細胞培養は、−130℃以下の温度で、無期限とは言えないまでも長期間にわたり保存することが可能です。ATCCでは、40年以上凍結保存された培養物から細胞を回収した実績があります。凍結保存の利点は、必要となる装置や試薬への投資を大きく上回ります。

主な利点は以下のとおりです。

• 装置の故障や、微生物または他の細胞株によるコンタミネーションから培養を失うことを防ぐための安全ストックの確保
• 使用されていない培養を維持するために必要となる時間、エネルギー、および原料の削減
• 有限の細胞分裂回数を有し、最終的に老化に至る細胞の保存
• 遺伝的不安定性や選択圧に起因する表現型ドリフトの防止
• 一連の実験に使用可能な標準試薬の作成（出典：ATCC動物細胞培養ガイド）
   

1. 細胞を300～400×gで4～5分間遠心分離し、細胞ペレットを得ます。その後、無菌的に上清を除去します。
2. ペレットを2～8℃の凍結保存液に懸濁します。十分に撹拌した後、懸濁液を細胞凍結バイアルに移します（例：1.5 mLの凍結バイアルに1.0 mLの懸濁液）。
3. 凍結速度制御装置を用いて、1分あたり 1～2℃の速度で細胞を徐々に凍結し、バイアルを液体窒素（気相）中に保存します。代替法として、バイアルを凍結容器に入れて−80℃で一晩保存します。翌日に細胞凍結バイアルを液体窒素へ移します（気相での保存を推奨）。
4. 液体窒素中で24時間保存後、1本のバイアルを融解し、凍結保存の効率を評価します。